МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель Главного
государственного санитарного
врача СССР А.И.Заиченко
17.10.1980 N 2260-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по гигиеническому контролю загрязнения
морской среды
1. ВВЕДЕНИЕ
Правила охраны поверхностных вод от загрязнения сточными
водами N 1166-74 и Правила санитарной охраны прибрежных вод морей
N 1210-74 предусматривают предупреждение и устранение загрязнения
рек бассейнов и прибрежных районов морей с целью создания
благоприятных гигиенических условий хозяйственно-питьевого (в том
числе, после опреснения), оздоровительно-лечебного и
культурно-бытового использования населением пресных и морских вод.
Действующие Правила санитарной охраны прибрежных вод морей и
"Инструктивно-методические указания по устройству, эксплуатации и
санитарному контролю плавательных бассейнов с морской водой
N 1437-76 включают принципиально новое определение границ
прибрежных охраняемых районов морей с зонированием в зависимости
от характера и интенсивности организованного водопользования,
дифференцированные требования к составу и свойствам морской воды
района водопользования и зоны его санитарной охраны, основные
требования и нормативы к использованию морских вод в
оздоровительно-лечебных целях.
Разработанные методические указания предназначены для органов
и учреждений санитарно-эпидемиологической службы,
научно-исследовательских институтов и кафедр гигиенического
профиля, а также других учреждений, занятых вопросами охраны
морской среды, и должны способствовать дальнейшему
совершенствованию их деятельности по разработке и контролю за
выполнением мер, направленных на предотвращение загрязнения морей.
Методические указания разработаны Институтом общей и
коммунальной гигиены им. А.Н.Сысина АМН СССР (В.Г.Субботин,
Е.П.Сергеев, Ю.А.Рахманин, Т.З.Артемова, Р.М.Абиева, В.И.Немыря,
А.Е.Недачин, Ю.Н.Никитина, А.И.Мельникова) и Министерством
здравоохранения СССР (З.В.Левашова).
При подготовке указаний приняты предложения Всесоюзного
НИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических
масс Минздрава СССР Московского НИИ гигиены им. Ф.Ф.Эрнсмана и
Ростовского-на-Дону НИИ эпидемиологии, микробиологии и гигиены
Минздрава РСФСР, Киевского НИИ общей и коммунальной гигиены
им. А.Н.Марзеева Минздрава Украинской ССР, Таллинского НИИ
эпидемиологии, микробиологии и гигиены, Института
экспериментальной и клинической медицины, Республиканской,
Пярнуской и Хариоской СЭС Минздрава Эстонской ССР,
СЭС Красноводской области Минздрава Туркменской ССР,
НИИ эпидемиологии, микробиологии и гигиены Минздрава Литовской
ССР, НИИ вирусологии, микробиологии и гигиены им. Г.М.Мусабекова
Минздрава Азербайджанской ССР, Государственного океанографического
института Госкомитета СССР по гидрометеорологии и контролю
окружающей природной среды, Военно-медицинской академии
им. С.М.Кирова МО СССР.
2. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ
2.1. Указания распространяются на районы морей, используемые
в настоящее время и предусматриваемые на перспективу для купания,
водного спорта и культурного отдыха с устройством пляжей и водных
станций в границах населенных мест, пригородов, курортов
(санаториев, домов отдыха, пансионатов) пионерских лагерей,
туристских баз, кемпингов, палаточных городков и других баз
длительного и кратковременного отдыха населения, а также на
водозаборы плавательных бассейнов, водолечебниц, ванн и других
бальнеологических сооружений и опреснительных установок с
использованием морских вод в оздоровительно-лечебных и
хозяйственно-питьевых целях.
2.2. Государственный санитарный контроль за качеством
прибрежных вод моря осуществляется органами и учреждениями
санитарно-эпидемиологической службы в границах прибрежного
охраняемого района моря и района водопользования по показателям,
предусмотренным действующими правилами и
инструктивно-методическими указаниями, с использованием
рекомендаций настоящих указаний.
2.3. При осуществлении контроля промышленного и бытового
загрязнения прибрежных вод из микробиологических показателей
определяющее санитарно-показательное значение имеют
лактозоположительные бактерии группы кишечных палочек. Наиболее
адекватными показателями вирусного загрязнения являются фаги
кишечных палочек.
2.4. В целях обеспечения благоприятных гигиенических условий
морского водопользования, исключающих возможность ухудшения
органолептических свойств воды и появления постороннего запаха и
привкуса пищевых продуктов моря научно-исследовательским
институтам и кафедрам гигиенического профиля рекомендуется
корректировка ПДК вредных веществ, принятых по органолептическому
признаку вредности в Правилах охраны поверхностных вод от
загрязнения сточными водами N 1166-74.
Примечания:
1. Перечень вредных веществ, для которых устанавливается
практический порог необычного для морских вод запаха, определяется
в зависимости от конкретной санитарной обстановки в районе
водопользования и по бассейну моря и целом.
2. Утверждение ПДК вредных веществ в морской воде
производится в установленном порядке.
2.5. При оценке потенциальной опасности для здоровья
населения вредных веществ, ПДК которых установлена для пресных
водоемов по токсикологическому признаку вредности, порядок
приоритетности выбора химических веществ, подлежащих контролю в
морской воде, определяется (с учетом данных литературы) в
следующей последовательности:
- Вещества, обладающие кожно-резорбтивным и раздражающим
действием, и стабильные высококумулятивные вещества, способные
накапливаться в пищевых продуктах морского происхождения (в
особенности, вещества, хорошо растворимые в жирах и плохо
растворимые в воде), допустимые концентрации которых в продуктах
питания наиболее низки или их содержание в продуктах питания не
допускается.
- Вещества, вызывающие отдаленные биологические эффекты
(мутагенный, тератогенный, канцерогенный, эмбриотоксический,
гонадотоксический, аллергенный, героэффект) или другие выраженные
неблагоприятные последствия.
- Тяжелые металлы и их органические соединения, а также
наиболее распространенные химические загрязнители - нефть и
нефтепродукты, фенолы, ПАВ, пестициды, биогенные вещества и др.
Примечания:
1. Последовательность выбора подлежащих контролю отдельных
вредных веществ устанавливается по степени их опасности для
биологических ресурсов и здоровья населения, а также с учетом
наличия методов индикации и количественного определения веществ в
морской воде и пищевых продуктах моря.
2. При выборе подлежащих контролю вредных веществ в морской
среде необходимо дополнительно учитывать способность веществ к
трансформации и деструкции в водной среде, степень накопления в
пищевых цепях (гидробионтах), степень контакта населения с этими
веществами при купании и употреблении в пищу продуктов моря (по
данным литературы).
3. ОБЩАЯ СХЕМА И ОРГАНИЗАЦИЯ КОНТРОЛЯ
3.1. Гигиеническая характеристика прибрежного охраняемого
района моря должна включать основные данные о
санитарно-технических условиях (состоянии водоснабжения,
канализования и др.) в приморских городах, курортах и других
населенных местах; сведения о качестве морской воды, существующих
и потенциальных источниках загрязнения морской среды; данные о
связи заболеваемости местного населения и отдыхающих с основными
видами морского водопользования.
3.2. Организация наблюдений осуществляется в зависимости от
санитарной ситуации и условий морского водопользования.
Обоснованию выбора районов наблюдений, в соответствии с
действующими правилами, должно предшествовать
санитарно-топографическое обследование побережья в границах
прибрежного охраняемого района моря.
3.3. Месторасположение точек контроля определяется
функциональным зонированием района водопользования. При этом
наблюдения в отдельных точках должны характеризовать санитарное
состояние определенной функциональной зоны - пляжей, зон
культурно-бытового водопользования; зоны водозаборов для
оздоровительно-лечебного и хозяйственно-питьевого (после
опреснения) использования морских вод; участков, используемых в
оздоровительных и спортивных целях, для отдыха на воде,
любительского лова рыбы и др.
3.4. Точки отбора проб морской воды выбирают:
- в зависимости от ширины и протяженности зоны
культурно-бытового водопользования (не менее двух точек в местах
массового купания);
- в местах расположения морских водозаборных сооружений;
- на участках оздоровительно-спортивного использования
(минимум 1 точка);
- на границе района водопользования по направлению к
источнику загрязнения (1 точка).
3.5. Для определения границ зон, подверженных влиянию
источников загрязнений, в том числе подлежащих ликвидации выпусков
сточных вод, в отдельных случаях рекомендуется динамичный отбор
контрольных проб морской воды у погруженных поплавков, движение
которых соответствует скорости и направлению перемещения
поверхностного слоя загрязнений морской воды (2 деревянных
крестообразных поплавка с отрегулированным грузом и сигнальным
флажком; 4 связки из двух заполненных водой бутылок, почти
|3. |Вода дистиллированная | 25 мл | 12,5 мл |
|---+----------------------------+-------------+-----------------|
| |Натрий двууглекислый | 0,25 г | 0,5 г |
------------------------------------------------------------------
Раздельная стерилизация растворов 1, 2 и 3 при 0,5 атм в
течение 12 мин. После стерилизации растворы смешать, проверить
pH (10), прибавить 20000 ед. полимиксина, 0,5 мл 1,6% спиртового
раствора бромтимолового синего, разлить в пробирки по 5 мл. В
среду удвоенной концентрации прибавляют 40000 ед. полимиксина и
1 мл бромтимолового синего. Разлить в колбы или флаконы по 10, 50
или 100 мл соответственно количеству исследуемой воды.
Приготовление молочно-ингибиторной среды
Питательного агара - 85 мл
Стерильного снятого молока - 15 мл
0,01% водного раствора кристаллического - 1,25 мл
фиолетового
2% водного раствора теллурита калия - 1 мл
Хорошо смешать и разлить в чашки.
Титрационный метод одновременного определения
лактозоположительных кишечных
палочек и энтерококков
Для определения количества энтерококков можно воспользоваться
посевами в лактозо-пептонную среду накопления, которые были
сделаны для определения бактерий группы кишечных палочек.
Через 48 часов инкубации посевов при температуре
37 град. +- 0,5 град. C из среды накопления, где имеет место
помутнение, независимо от наличия или отсутствия газообразования
делают высев (по 6 секторов) на одну из подтверждающих элективных
сред (Сланеца-Бертли, Турчинского). При этом необходимо соблюдать
следующие условия: верхнюю часть среды слить, оставшуюся часть
размешать и произвести посев бактериологической петлей диаметром
2 - 3 мм, внося материал 3 раза. При последующем посеве штрихом
предусмотреть, чтобы к концу штриха выросли изолированные колонии.
При наличии на подтверждающей среде характерного для
энтерококков роста дают положительный ответ. При необходимости
убедиться в наличии на секторах подтверждающей среды энтерококков
выполняют микроскопию с окраской по Граму, а при работе со средой
Турчинского - еще и каталазную пробу.
4.2.5. Определение числа стафилокков
Стафиллококки служат показателем загрязнения воды при купании
микрофлорой верхних дыхательных путей и кожных покровов человека.
Поэтому при оценке качества прибрежных морских вод, используемых
для купания, этот показатель имеет самостоятельное значение наряду
с индикаторами фекального загрязнения воды.
Вода с содержанием стафилококков свыше 100 в 1 л может
представлять опасность в зпидемичиском отношении. Индикаторное
значение имеет, в основном, Stpn. aureus.
Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из
определенного объема анализируемой воды на мембранные фильтры,
выращивании их при 37 град. +- 0,5 град. C на
молочно-желточно-солевом агаре (МЖСА) с полимиксином, подсчете
лецитовителлазоактивных стафилококков.
Через мембранные фильтры профильтровывают 50 мл воды с таким
расчетом, чтобы выросли изолированные колонии (например, 5 мл,
20 мл, 25 мл). Фильтры помещают на среду МЖСА с полимиксином, не
содержащую на поверхности следов влаги, выращивают при температуре
37 град. +- 0,5 град. C в течение 24 часов. На эту среду при
большом загрязнении стафилококками можно делать прямые посевы 1 мл
и меньших объемов. Чашки с посевами можно оставить при комнатной
температуре еще на 18 - 20 часов для лучшего проявления
пигментообразования.
Подсчитывают количество выпуклых блестящих колоний, которые
образовали характерный пигмент (золотистый, палевый,
лимонно-желтый, оранжевый, реже белый) и радужную зону вокруг.
При необходимости подтвердить наличие стафилококков,
обладающих лецитовителлазной активностью, подозрительные колонии
пересевают "пятнами" на чашки, разделенные на квадраты, со средой
того же состава, отмечают пигментообразование, радужную зону
разложения желтка и зону помутнения среды, а также характерную для
стафилококков форму клеток при микроскопировании.
При отсутствии мембранных фильтров можно определить
стафилококки титрационным методом, используя в качестве среды
накопления солевой бульон. Схема посева должна соответствовать
таблице на стр. 17, по которой определяют индекс бактерий. Высев
из сред накопления делают на МЖСА с полимиксином, отмечая наличие
лецитовителлазоактивных стафилококков.
Приготовление молочно-желточно-солевого
агара (МЖСА)
Сухого питательного агара Дагестанского НИИПС - 45 г
Натрия хлористого - 90 г
Дистиллированной воды - до 1000 мл
Расплавляют при нагревании, разливают в сосуды и стерилизуют
при 120 град. +- 2 град. C (1,1 кгс/ кв. см) 20 мин.
Перед употреблением в расплавленный и охлажденный до
50 - 55 град. C солевой агар добавляют: стерильное обезжиренное
молоко - 60 мл, одни яичный желток, тщательно смешанный с помощью
стеклянных бус с 50 мл физиологического раствора, полимиксин М
(раствор хранить не более 14 дней) - 300000 ед. Тщательно
смешивают и разливают в чашки Петри толстым слоем по 20 - 25 мл
для выращивания бактерий на мембранных фильтрах и тонким слоем по
15 мл для подтверждающего этапа.
4.2.6. Выделение патогенных энтеробактерий
Вследствие незначительной концентрации патогенных
энтеробактерий в морской воде непосредственный посев воды на
плотные питательные среды не даст зачастую возможности выделить
эти микроорганизмы из воды. Более надежные результаты можно
получить после предварительного концентрирования этих бактерий из
воды или накопления в средах обогащения.
Рецептура среды обогащения с охмеленным
суслом и способ ее применения
Наиболее результативной для выделения патогенных
энтеробактерий из морской воды является среда накопления с
охмеленным руслом. Основной питательный субстрат среды -
охмеленное сусло - является полуфабрикатом производства пива и
может быть приобретен на пивоваренном заводе. Охмеленное сусло
отбирают в стерильную посуду; его можно сохранять в холодильнике
(+4 град. C) в течение 3 - 4 недель.
Приготовление среды производят ex temporae: к 100 мл
охмеленного сусла в плоскодонной колбе добавляют 5 г пептона,
подогревают на небольшом огне при перемешивании, доводят до
кипения и кипятят в течение 10 минут.
В остуженную среду доливают 400 мл исследуемой морской воды,
устанавливают pH 7,3 - 7,5 (для подщелачивания может быть
добавлено несколько капель 20% раствора NaOH). Затем добавляют
7 - 9 мл 0,1% раствор (водный) бриллиантового зеленого: при
небольшом микробном загрязнении исследуемой воды - 7 мл, при
большом - 9 мл. После тщательного перемешивания посев ставят в
термостат для подращивання в течение 20 - 24 часов при
температуре 37 град. C.
Через сутки инкубации в термостате производят высев на
плотные питательные среды, для подращивания сальмонелл используют
висмут-сульфитный агар, для подращивания шигелл - агар с
эозин-метиленовым синим (ЭМС-агар) или среду Плоскирева.
На висмут-сульфитной среде сальмонеллы образуют черные и
зеленые колонии с темным центром, иногда и без центра, под
колонией на питательной среде образуется почернение. Шигеллы на
ЭМС-агаре и среде Плоскирева образуют мелкие прозрачные круглые
нежные колонии.
С каждой чашки снимают для дальнейшего изучения по
4 - 5 колоний, "подозрительных" на сальмонеллы и шигеллы, и
засевают на дифференциальные среды Росселя, Олькиницкого и т. п.).
Дальнейшие исследования проводятся по общепринятой методике.
Через сутки инкубации при 37 град. C с дифференциальных сред
отбирают культуры, имеющие типичные ферментативные реакции в
отношении используемых в средах углеводов, а также те культуры,
которые имеют некоторые отклонения от типичных свойств, но
характеризуются нежным ростом на поверхности скошенного агара.
Затем культуру проверяют на фаголизабельность при помощи
О-сальмонеллезного и дизентерийного фагов. При наличии
фаголизабельности у выделенных культур проводят серологическое
определение культур, устанавливают их родовую и типовую
принадлежность.
Для определения сальмонелл в сточной воде помимо охмеленного
сусла можно использовать магниевую среду накопления (по Калине).
Готовят 3 раствора:
1. Пептона отечественного производства - 4,2 г
Хлористого натрия - 7 г
Калия фосфорнокислого однозамещенного - 1,5 г
Дрожжевого экстракта - 20 мл
Воды дистиллированной - 890 мл
2. Хлористого магния кристаллического - 36 г
Воды дистиллированной - 90 мл
3. 0,1% водного раствора бриллиантового - 5 мл
зеленого
Растворы смешивают, стерилизуют при 0,5 атм 30 мин. При
посевах исследуемого материала в количестве более 100 мл
концентрацию всех ингредиентов, кроме дистиллированной воды,
удваивают. 100 мл сточной воды засевают в равное количество среды
накопления удвоенной концентрации, 10 мл сточной воды - в 100 мл
среды обычной концентрации, 1 мл сточной воды - в 10 мл среде
обычной концентрации.
Навески химических реактивов и растворы ингредиентов можно
вносить непосредственно в исследуемую воду и растворять их при
встряхивании. На 100 мл сточной воды необходимо добавить 3,9 г
хлористого магния кристаллического, 0,8 г хлористого натрия,
0,16 г калия фосфорнокислого однозамещенного безводного, 5 мл
10% раствора пептона, 2,2 мл дрожжевого экстракта и 0,5 мл
0,1% раствора бриллиантового зеленого.
После 24-часовой инкубации в термостате при 37 град. C делают
высев на 2 - 3 чашки с висмут-сульфитным агаром. Чашки с посевом
инкубируют при 37 град. C 18 - 20 часов.
Подозрительные колонии на сальмонеллы необходимо исследовать
общепринятыми методами.
4.2.7. Выделение вирусов с помощью
тампонного метода Моора
Стерильные тампоны погружают на глубину 3 - 5 м в воду в
точках отбора проб. Сбор тампонов и последующую транспортировку
производят в стерильных банках емкостью 0,5 л и до последующей
обработки хранят в замороженном состоянии при температуре минус
15 - 20 град. C.
Затем пробы (тампоны) размораживают. В сосуд, где находится
тампон, вносят от 10 до 20 мл 0,5 M фосфатного буфера. Тампон
тщательно разминают в течение 5 минут и отжимают. Выход каждой
пробы составляет 60 - 100 мл. pH жидкости устанавливается 8 - 8,2
путем добавления 1 M NaOH. Затем жидкая фаза отсасывается в
центрифужные пробирки и центрифугируется при 2500 об/мин., в
течение 20 минут. Надосадочная жидкость отсасывается в стерильные
пробирки с резиновыми пробками и замораживается на 1 - 2 суток,
после чего пробы снова оттаивают и центрифугируют в том же режиме
и добавляют равное количество эфира. Флаконы встряхивают для
получения гомогенной эмульсии и, закрытые ватно-марлевыми
пробками, помещают в холодильник с температурой 4 - 6 град. C.
Через 2 - 3 дня (после испарения эфира) флаконы закрывают
резиновыми пробками и хранят в замороженном состоянии до
вирусологического исследования на культуре ткани.
4.2.8. Выделение вирусов
на ионнообменной колонке
Для концентрирования вирусов используют сильноосновной
анионит отечественного производства AB-17, выпускаемый в
гидроксильной и Cl-формах. Для адсорбции вирусов могут быть
использованы обе формы.
Перед употреблением сухую ионообменную смолу для набухания
замачивают в бидистиллированной воде не менее чем на 24 часа.
После этого смолу переводят в Cl-форму путем обработки ее в
течение 3 - 4 дней соляной кислотой из расчета не менее 1 л
раствора кислоты на 100 мл набухшей смолы (1 N раствора - для
гидроксильной и 0,5 N раствора для Cl-формы). Затем смолу
промывают стерильной бидистиллированной водой до тех пор, пока
рН воды не станет нейтральной или равной pH исходной воды.
Обработанную смолу вместе с бидистиллированной водой заливают в
бюретку на 25 - 50 мл, на дно которой помещают кусочек стеклянной
ваты. Высота столбика смолы - 8 - 10 см. До использования смолу
необходимо держать под водой.
При исследовании в бутыль с тубусом или сифоном наливают
исследуемую воду в объеме 1 - 3 л, pH воды доводят до 5,5. Бутыль
ставят выше колонки и вода самотеком стекает по сифону и
присоединенной к нему резиновой трубке (тщательно прокипяченной в
дистиллированной воде), в колонку с анионитом. Зажимом, надетым на
трубку, регулируют подачу воды, в колонку с таким расчетом, чтобы
столбик смолы был постоянно под водой, но вода не перетекала через
край бюретки. Загрязненную мутную морскую воду, а также сточную
воду целесообразно предварительно профильтровать через несколько
слоев марли или стекловату.
Элюацию вирусов со смолы производят 0,5 M раствором
фосфатного буфера (Na HPO ), имеющим pH 8,2. Для этого после
2 4
пропускания через колонку всего исследуемого объема воды бюретку
продувают грушей для удаления остатков воды, заливают 10 мл
указанного буфера, закрывают резиновой пробкой и тщательно
взбалтывают. Буфер оставляют в колонке со смолой на 1 - 2 часа при
комнатной температуре, на 16 - 18 часов при 4 - 6 град. C, после
чего производят одномоментный отбор всего элюата.
Последующая обработка проб производится так же, как и при
использовании метода Моора. Вирусологическое исследование
обработанных проб производится по методикам, принятым в
вирусологической практике. Для более полного выделения
энтеровирусов из проб природных вод анализ производят параллельно
на двух видах культуры ткани: первичной и перевиваемой.
В качестве первично-трипсинизированной культуры ткани
используются клетки почек обезьян макака-резус, чувствительные к
группе вирусов полиомиелита, Коксаки В, некоторым типам вирусов
Коксаки A и ECHO вирусам, а также к группе аденовирусов.
В качестве перевиваемой культуры используют клетки Hela
(опухолевые клетки человеческого происхождения), чувствительные к
некоторым типам вирусов Коксаки A, ECHO вирусам, аденовирусам.
Заражение производят на выращенном монослое. Для этого после
удаления питательной среды на монослой клеток наносят 0,5 - 1 мл
исследуемой воды и флаконы (объемом 50 - 60 мл) помещают в
термостат при температуре 37 град. C. После 30-минутного контакта
вирусосодержащего материала с клетками пробу сливают и во флаконы
доливают 10 мл поддерживающей среды.
Зараженные культуры клеток инкубируют в термостате от 7 до
9 дней для выделения энтеровирусов и 17 - 20 дней - для выделения
аденовирусов.
При отсутствии цитопатического действия на культуру ткани
проводят два слепых пассажа по общепринятой методике - при
заражении не менее 2 флаконов.
4.2.9. Выделение и титрование
бактериофагов
Для выделения и титрования бактериофагов применяется метод
агаровых слоев по Грация: 1,5% мясопептонный агар разливают на
чашки Петри в количестве 25 - 30 мл. Чашки высушивают под
бактерицидными лампами. В пробирки разливают 0,7% мясопептонный
агар в количестве 2,5 мл и остужают до 47 град. C. Затем 1 мл
исследуемой пробы в соответствующем разведении и 0,1 мл взвеси
суточной культуры Е. coli помещают в пробирку с 0,7% агаром,
быстро перемешивают и выливают на поверхность 1,5% агара. После
застывания 0,7% агара чашки Петри (в перевернутом виде) помещают в
термостат при 37 град. C для инкубирования. Подсчет колоний фага
производят на следующий день.
4.3. Оценка влияния химических веществ
на органолептические свойства морских вод
Оценка влияния химических веществ на органолептические
свойства морских вод имеет целью определение необходимости
корректировки ПДК вредных веществ, установленных для пресных
водоемов по органолептическому признаку вредности и производится
на основе установления, по методике "закрытого опыта",
дифференцированного для прибрежных вод различных морей,
практического (интенсивностью не более двух баллов) порога
восприятия необычного (постороннего) для этих вод запаха.
Примечание:
Корректировке подлежат также ПДК тех вредных веществ, при
нормировании которых в воде определяющим является провоцирование
посторонних запахов.
Последовательность проведения опытов по определению
практического порога восприятия запаха наиболее распространенных
химических загрязнителей в прибрежном охраняемом районе моря
следующая:
а) Для ориентировочного представления о пороговых величинах
предварительно проводится опыт оценки интенсивности необычного для
морской воды запаха путем анализа (по пятибальной шкале)
последовательных двукратных разведений наиболее высокой
концентрации исследуемого вещества в морской воде в районе
водопользования.
б) Затем в интервале пороговых концентраций изучаемого
вещества, соответствующих оценке 1 - 2 балла, выбираются
4 - 5 концентраций, отличающихся в 3, а затем в 1,5 раза, и каждая
из этих концентраций (опытная проба) группируется с 4 контрольными
пробами.
Одораторам предлагается найти опытную пробу в каждом
комплексе проб. Предварительно одораторы должны быть ознакомлены с
характером запаха вещества. При этом интенсивность
органолептических свойств (запаха) демонстрационной пробы не
должна быть более 2 - 3 баллов. Необходимо также проверить, не
обладает ли исследуемое вещество феноменом последействия,
маскировки или привыкания.
Последовательность поиска опытной пробы проводится от большей
концентрации вещества к меньшей. В таблице регистрируются
результаты опроса (знаками плюс и минус или как-либо иначе).
Общее число наблюдений по каждой концентрации должно быть не
менее 30 - 50, результаты первого опыта не учитываются. Далее
подсчитывается процент одораторов, правильно указавших опытную
пробу из всего числа лиц, принимавших участие в опыте.
Если процент правильных ответов на испытанные концентрации
вещества выражается величинами как больше, так и меньше 50%, то
опыт закончен. В противном случае необходимо продолжить работу.
Примечание:
При получении для испытанной концентрации примерно 20%
правильных ответов нецелесообразно изучать более низкие
концентрации вещества.
в) Анализ полученных данных проводится методом
пробит-анализа.
Процент правильных ответов (или их пробиты) от каждой
испытанной концентрации наносится на график в двойном
логарифмическом масштабе и результаты обрабатываются любым
приемлемым методом пробит-анализа с вычислением величины
среднеэффективной концентрации (EC ) и ее ошибки.
50
Среднеэффективная концентрация (EC ) - это порог ощущения,
50
соответствующий одному баллу по пятибальной шкале оценки
интенсивности органолептических свойств воды. Данная величина
полностью отвечает всем требованиям, предъявленным
психофизиологией для точной характеристики пороговых стимулов и
сенсорных раздражителей.
Для получения особо точных результатов и исключения ошибки,
связанной с вероятностью случайных правильных ответов, можно из
процента правильных ответов вычислить соответственно процент
ошибочных ответов, приходящихся в среднем на одну контрольную
пробу.
Безупречную точность обеспечивает стандартизация данных по
формуле Шнейдер-Орелли:
Хпр. Хош.
Хст. = __________ - _________ x 100,
100 - Хош. 100 - Хош.
где Хст. - стандартизированный процент правильных ответов,
Хпр. - экспериментально полученный процент правильных
ответов,
Хош. - процент ошибочных ответов, приходящихся в данной
групировке проб на одну контрольную пробу.
Для определения практического порога, соответствующего двум
баллам, величина EC умножается на показатель разностного порога
50
ощущения запаха, точное значение которого находится в специальном
опыте.
В известной мере оправданным может быть получение
практического порога вещества по влиянию на запах воды в
результате простого умножения величины EC на коэффициент 1,5.
50