МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ЗАМЕСТИТЕЛЬ ГЛАВНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО
САНИТАРНОГО ВРАЧА СССР
УТВЕРЖДАЮ
Заместитель Главного
государственного санитарного
врача СССР
А.И.Заиченко
31.08.1987
НОРМАТИВЫ И МЕТОДЫ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ
ПРОДУКТОВ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ,
ИЗГОТОВЛЕННЫХ НА МОЛОЧНЫХ КУХНЯХ
СИСТЕМЫ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
СанПиН 42-123-4423-87
Настоящие правила определяют нормативы и методы
микробиологического контроля продуктов детского питания,
изготовленных на молочных кухнях системы здравоохранения;
предназначаются для учреждений санитарно-эпидемиологической службы
Министерства здравоохранения СССР. С утверждением настоящих
санитарных правил утрачивает силу п. 55 санитарных правил для
детских молочных кухонь N 942-71 от 25 ноября 1971 г.
В связи с повышенной восприимчивостью детей раннего возраста
к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам настоящие
правила включают расширенный спектр микробиологических
показателей, нормируемых в продуктах детского питания,
изготовленных на молочных кухнях.
учитывая необходимость повышения эффективности
микробиологического контроля за качеством и безопасностью
продуктов детского питания, в Санитарные правила введены
усовершенствованные в соответствии с рекомендациями ФАО/ВОЗ методы
анализа нормируемых групп микроорганизмов. Методы адаптированы к
условиям работы СЭС.
Результаты микробиологических анализов могут быть получены
через 48-96 часов, т. е. в сроки, когда продукция молочных кухонь
уже реализована. Поэтому микробиологический контроль качества
продуктов, изготовленных детскими молочными кухнями, является
ретроспективным методом и служит целям объективной оценки
санитарно- гигиенического содержания молочных кухонь, соблюдения
технологического процесса и правил личной гигиены персонала.
1. Микробиологические нормативы для продуктов
детского питания, изготовленных
на молочных кухнях
1.1. Микробиологические нормативы для всех видов продуктов
детского питания, изготовленных на молочных кухнях, приведены в
табл. 1, 2, 3.
1.2. Количество мезофильных аэробных и факультативно
анаэробных микроорганизмов соответствует нормативам утвержденных
ТУ для каждого вида продукта и выражается в КОЕ/г (кв. см), где
КОЕ - колониеобразующие единицы, соответствуют принятому ранее
обозначению "клетки". Этот показатель не определяется в
кисломолочных продуктах.
1.3 Санитарно-показательные, условно-патогенные и патогенные
микроорганизмы контролируются по альтернативному принципу: во всех
таблицах для бактерий группы кишечных палочек (БГКП), эшерихий
коли, коагулазоположительных стафилококков (S aureus), патогенных
микроорганизмов, в т. ч. сальмонелл, нормируется та масса готового
продукта (в граммах или куб. см), в которой перечисленные
микроорганизмы не допускаются.
1.4. Оценка результатов микробиологических анализов.
1.4.4. Обнаружение повышенного количества мезофильных
аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов позволяет
установить нарушения температурного режима в процессе
приготовления продукта.
1.4.2. Обнаружения бактерий группы кишечных палочек в
нормируемой массе продукта указывет на неудовлетворительность
санитарно-гигиенических условий при изготовлении, а присутствие
эшерихий коли указывает еще и на вторичное загрязнение продукта
при несоблюдении правил личной гигиены лицами, участвующими в
изготовлении его.
Таблица 1
Микробиологические нормативы
для стерилизованных
продуктов детского питания (*)
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------
| NN | Наименование продукта | Возраст детей |Мезофильные | Не допускаются в массе продукта |
| пп.| | |аеробные и фак. |-----------------------------------------|
| | | |анаеробные | БГКП | Е. coli |S. aureus|патогенные |
| | | |микроорганизмы | | | | в т. ч. |
| | | |в 1 куб. см КОЕ,| | | |сальмонеллы|
| | | |не более | | | | |
|----+--------------------------+----------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 1. |Смесь адаптированная |с первых дней | 100 |в 10 куб.|в 10 куб.|в 10 куб.| в 100 куб.|
| |стерилизованная "Малютка" |жизни до | | см | см | см | см |
| | |3-х мес. | | | | | |
|----+--------------------------+----------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 2. |Смесь адаптированная |с первых дней | 100 |в 10 куб.|в 10 куб.|в 10 куб.| в 100 куб.|
| |восстановленная "Малютка" |жизни | | см | см | см | см |
|----+--------------------------+----------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 3. |Стериализованная молочная |с первых дней | 100 |в 10 куб.|в 10 куб.|в 10 куб.| в 100 куб.|
| |смесь "Виталакт" |жизни | | см | см | см | см |
|----+--------------------------+----------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 4. |Молоко стерилизованное |с 6 мес. | 100 |в 10 куб.|в 10 куб.|в 10 куб.| в 100 куб.|
| |цельное | | | см | см | см | см |
|----+--------------------------+----------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 5. |Молоко стерилизованное |с 6 мес. | 100 |в 10 куб.|в 10 куб.|в 10 куб.| в 100 куб.|
| |витаминизированное | | | см | см | см | см |
|----+--------------------------+----------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 6. |Сливки стерилизованные |с 4,5 мес. | 100 |в 10 куб.|в 10 куб.|в 10 куб.| в 100 куб.|
| | |(в пюре) | | см | см | см | см |
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Примечание: (*) Дрожжи и плесневые грибы в 1 куб. см готовых
продуктов не допускаються. Анализ проводят по ГОСТ 26888-86.
Таблица 2
Микробиологические нормативы
для кисломолочных
продуктов детского питания
--------------------------------------------------------------------------------------------
| NN | Наименование продукта | Возраст детей | Не допускаются в массе продукта |
| пп.| | |-----------------------------------------|
| | | | БГКП | Е. coli |S. aureus|патогенные |
| | | | | | | в т. ч. |
| | | | | | |сальмонеллы|
|----+--------------------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 1. |Адаптированная ацидофиль- |с первых дней |в 3 куб. |в 10 куб.|в 10 куб.| в 50 куб. |
| |ная смесь "Малютка" (*) |жизни до 6 мес. | см | см | см | см |
|----+--------------------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 2. |Кисломолочный "Виталакт" |с 2-х мес. до |в 3 куб. |в 10 куб.|в 10 куб.| в 50 куб. |
| |(ВК-1) |1 года | см | см | см | см |
|----+--------------------------+----------------+---------+---------+---------+-----------|
| 3. |Кефир детский |с 5 мес. |в 3 куб. |в 10 куб.|в 10 куб.| в 50 куб. |
| | | | см | см | см | см |
по Граму, мясо-пептонного бульона (МПБ), мясо-пептонного агара
(МПА) производят согласно ГОСТ 9225-84; ГОСТ 18963-73.
4.2. Специальные питательные среды и реактивы.
4.2.1. Среда для определения общего количества мезофильных
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
Сухой питательный агар производства - 35 г
ДагНИИ питательных сред
Экстракт кормовых дрожжей производ - 2,5 г *** МНИИВС
им.Мечникова
Глюкоза - 1.0 г
Вода дистилированная - 1000,0 куб. см
pH - 7,0
Стерилизация в автоклаве при (121+-2) град.С в течение
(21+-3) мин.
4.2.2. Среды и реактивы для выделения бактерий группы
кишечных палочек и эшерихий коли.
4.2.2.1. Среда Кесслер с лактозой.
К 1 куб. дм водопроводной воды добавляют (10,0+-0,1) г
пептона в 50 куб. см желчи крупного рогатого скота. Смесь кипятят
на водяной бане при помешивании 20-30 мин. Затем фильтруют ее
через ватно-марлевый фильтр, добавляют 2,5 г лактозы: доводят
объем водой до 1 куб. дм. Устанавливают рН 7,4-7,6 используя 1 н
растворы NaOH или HCL и проверяя значение рН на потенциометре или
универсальной индикаторной бумаге. Добавляют 4 куб. см 1%-ного
раствора генцианового фиолетового, разливают в колбы по 90 куб. см
и в пробирки по 10 куб. см, закладывают поплавки (пробирки
Уленгута) отверстием книзу.
Стерилизуют при (121+-2) град.С в течение 15 мин.
4.2.2.2. 1% раствор генцианового (кристаллического)
фиолетового.
Взвешивают (1,0+-0,01) г генцианового (кристаллического)
фиолетового, помещают в мерную колбу: вместимостью 100 куб. см и
доливают до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при
температуре (4+-1) град.С в течение 7 суток.
4.2.2.3. Среда Кесслер с лактозой из сухих питательных сред.
Среда готовится согласно прописи на этикетке банки.
4.2.2.4. Среда Эндо.
Среду Эндо производства ДагНИИ питательных сред готовят
согласно прописи на этикетке банки. Изготовленную и разлитую в
стерильные чашки Петри среду можно хранить при температуре (4+-1)
град.С до 10 суток.
4.2.2.5. Среда на индол.
Взвешивают (10,0+-0,1) г сухого панкреатического гидлизата
казеина (или 100,0 куб. см жидкого панкреатического гидролизата
казеина с содержанием 500 мг% аминного азота). (5,0+-0,1)г
хлористого натрия, (1,0+-0,01) г ДЛ-триптофана, растворяют в
1000 куб. см дистиллированной воды. Доводят рН до 7.0+-0.1 и
растворами NaOH или HCL и измеряя значение рН на потенциометре или
по универсальной индикаторной бумаге. Разливают в пробирки по
5 куб. см, стерилизуют 15 мин. при (121+-2) град.С.
4.2.2.6. Реактив па индол (Эрлиха).
Взвешивают (5,0+-0,1) г пара-диметиламинооензальдегида в
стеклянном стакане вместимостью 100 см, помещают в коническую
колбу вместимостью 200 куб. см и растворяют в (50+-1) куб. см
этилового спирта. С помощью мерного цилиндра вместимостью
100 куб. см медленно добавляют (50+-1) куб. см концентрированной
соляной кислоты. Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при
температуре (4+-1) град.С.
4.2.2.7. Среда Кларка.
Взвешивают (5,0+-0,1) г пептона, (5,0+-0,1) г глюкозы,
(5,0+-0,1) г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют
ингредиенты в 950 куб. см дистиллированной воды, устанавливают
рН 6,9+-0,1, используют 1 н растворы NaOH или HCL, проверяя
значение рН на потенциометре или универсальной индикаторной
бумагой. Доводят общий объем до 1 куб. дм дистиллированной водой и
фильтруют при необходимости. Разливают в пробирки по 5 куб. см,
стерилизуют в течение 20 мин при (115+-2) град.С.
4 2.2.8. 90% раствор этилового спирта.
Добавляют к (900+-5) куб.см 96%-ного этилового спирта (60+-1)
куб. см дистиллированной воды в колбе емкостью 1000 куб. см.
4.2.2.9. Раствор индикатора метилового красного.
Взвешивают (0,1+-0,001) г индикатора метилового красного,
количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 куб. см,
растворяют в (300+-1) куб. см 90%-ного раствора этилового спирта
(п. 4.2.2.8), добавляют до 500 куб. см дистиллированной водой.
Хранят раствор з колбе с притертой пробкой при температуре
(4+-1) град.С.
4.2.2.10. 5% раствор альфа-нафтола.
Взвешивают (5,0+-0,1) г а-нафтола, растворяют в
(100+-1) куб. см абсолютного этилового спирта. При отсутствии
абсолютного этилового спирта можно использовать ректификованный
этиловый спирт 96 град.С. Раствор должен быть свежеприготовленным.
4.2.2.11. 40%-ный раствор гидроокиси калия.
Взвешивают (40,0+-0,1) г гидроокиси калия в стакане
вместимостью 100 куб. см, переносят в мерную колбу вместимостью
100 куб. см, растворяют в (60,0+-1) см дистиллированной воды,
затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при
температуре (4+-1) град.С.
4.2.2.12. Среда Козера.
Взвешивают (1,5+-0,1) г натрия-аммония фосфорнокислого,
(1,0+-0,01) г калия фосфорнокислого двузамещенного, (0,2+-0,01) г
магния сульфата, (3,0+-0,1) г натрия лимоннокислого
трехзамещенного. Растворяют в 950 куб. см дистиллированной воды.
Добавляют 10 куб. см 0,5%-ного спиртового раствора бромтимолового
синего. Устанавливают рН 6.8 1 н растворами NaOH или HCL, проверяя
значение рН на потенциометре. Доводят объем дистиллированной водой
до метки (1 куб. дм). Разливают по 10 куб. см в пробирки,
стерилизуют в течение 15 мин при (121+-2) град.С.
4.2.2.13. 0,5%-ный раствор бромтимолового синего в спирте.
Взвешивают (0,5+-0,01) г бромтимолового синего, помещают в
мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят этиловым спиртом
до метки. Раствор хранят при температуре (4+-1) град.С в течение
30 суток.
4.2.2.14. Среда Симмонса.
Среда готовится аналогично среде Козера (п. 4.2.2.12). Но
после измерения рН в нее добавляют (20+-0,1) г агара на 1 куб. дм,
прогревают на водяной бане до растапливания агара, стерилизуют в
течение 15 мин при (121+-2) град.С. Разливают в стерильные чашки
Петри или пробирки.
4.2.3. Среды и реактивы для выделения стафилококков.
4.2.3.1. Солевой бульон.
К (100+-1) куб. см мясопептонного бульона (МПБ) с рН 7,2-7,4
в колбе вместимостью 200 куб. см добавляют (6,5+-0,1) г хлористого
натрия и разливают в пробирки по (10,0+-0,1) куб. см. Стерилизуют
в автоклаве при (121+-2) град.С в течение (20+-3) мин.
4.2.3.2. Агар типа Байрд-Паркер.
30 г сухого питательного агара на основе ферментативного
гидролизата кормовых дрожжей, производства Да*станского НИИ
питательных сред, размешивают в 1 куб. дм дистиллированной воды,
добавляют 10 г пирувата натрия, 5 г хлористого лития, тщательно
перемешивают, Смесь нагревают при помешивании и кипятят в течение
1 минуты до полного растворения ингредиентов. Устанавливают
рН 7,2. Разливают во флаконы объемами 100-200-300 куб. см в
зависимости от потребности и стерилизуют при 121 град.С 15 мин.
Среда может хранится в течение месяца в условиях холодильника.
Перед употреблением в растопленную и охлажденную до 45-59 град.С
среду с соблюдением правил асептики прибавляют (из расчета на
100 куб. см среды) 0,5 куб. см 2% раствора теллурита калия в
5 куб. см эмульсии яичного желтка. Среду тщательно перемешивают н
разливают в чашки Петри в объеме не менее 20 куб. см на чашку.
Чашки со средой могут быть использованы в течение 24 часов,
максимум 48 часов. Перед посевом чашки со средой подсушивают в
термостате общепринятым способом.
4.2.3.3. Желточно-солевой агар (ЖСА).
Основа-солевой агар: к мясо-пептонному бульону (МПБ) с
рН 7,2-7,4 добавляют 2% агара и 6,5% хлористого натрия,
расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через
ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по
(100+-1) куб. см в колбы вместимостью 250 куб. см и стерилизуют
при (121+-2) град.С в течение (30+-3) мин. Получают солевой агар.
Вместо мясо-пептонного бульона можно использовать сухой
питательный агар, добавив к нему только 6.5% хлористого натрия.
ЖСА: на (100+-1) куб. см стерильного расплавленного и
остуженного до (45+-2) град.С солевого агара добавляют (20+-0,1)
куб. см эмульсии яичного желтка. После полного размешивания
желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по
20-25 куб. см и хранят в холодильнике до 5-7 дней.
4.2.3.4. Эмульсия яичного желтка.
На дно стерильной чашки Петри помешают куриное яйцо, которое
тщательно протирают ватой, смоченной этиловым спиртом. Стерильным
пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два
отверстия. Через одно из этих отверстий полностью удаляют белок, а
затем несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную
колбу вместимостью 200 куб. см. К желтку постепенно добавляют
(частями по 20-30 куб. см) 180-200 куб. см стерильного
физиологического раствора, затем содержимое тщательно встряхивают
до получения гомогенной массы.
4.2.3.5. Цитратная плазма кролика.
Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции
выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед
употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.
4.2.4. Среды и реактивы для выделения бактерий рода
Salmonella.
4.2.4.1. Магниевая среда.
Среда готовится из трех растворов (*):
--------------
(*) При использовании среды двойной концентрации масса
(объем) всех ингредиентов, кроме воды, удваивается.
I раствор:
пептон - 4,2 г
хлористый натрий (NaCL) - 7,15 г
дрожжевой диализат - 20.0 куб. см
калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,42 г
вода дистиллированная - 890,0 куб. см
II раствор:
магний хлористый кристаллический - 35.7 г
вода дистилированная - 90.0 куб. см
III раствор:
0.5%-ый водный раствор бриллиантового - 0,9 куб. см
зеленого
После растворения всех ингредиентов растворы соединяют,
разливают приготовленную таким образом среду в колбы и флаконы.
Среду стерилизуют при (112+-1) град.С в течение 30 мин.
4.2.4.2. 0,5%-ный водный раствор бриллиантового зеленого.
Для приготовления 0.5%-ного раствора взвешивают (0,5+-0,01) г
индикатора бриллиантового зеленого, вносят в стерильную мерную
колбу вместимостью 100 куб. см доводят стерильной дистилированной
водой до метки. Раствор хранят в холодильнике в течение 7 суток.
4.2.4 3. Дрожжевой диализат.
Взвешивают (1000+-10) г свежих хлебных (прессованных)
дрожжей, размешивают в (1000+-1) куб. см дистиллированной воды в
кастрюле до состояния гомогенной массы, которую переливают
целлофановый мешок, предварительно промыты дистиллированной,
водой. Мешок завязывают, обмывают под струей питьевой воды, а
затем дистиллированной водой и погружают в эмалированную кастрюлю,
в которую предварительно наливают (1300+-1) куб. см
дистиллированной воды. Мешок должен быть полностью погружен в
жидкость. Диализ ведут при температуре 60-80 град.С в течении
(6+-0.5) ч. 3а это время количество жидкости в кастрюле должно
уменьшиться примерно в 2 раза. Затем жидкость из кастрюли
переливают в стерильную бутыль и добавляют хлороформ (0,5% к
объему жидкости) и сохраняют при (6+-1) град.С до 7 месяцев.
4.2.4.4. Среда Мюллера.
К 90 куб. см стерильного мясо-пептонного бульона добавляют:
а) 4,5 г мела, предварительно простерилизованного во флаконе
сухим жаром (при 160 град.С в течение 2 ч);
б) 10 куб. см раствора гипосульфита натрия (50 г чистого
кристаллического гипосульфита натрия в 100 куб. см
дистиллированной воды стерилизуют текучим, паром в течение
30 мин);
в) 2 куб. см раствора Люголя (металлического йода 25 г,
йодистого калия 20 г, дистиллированной воды 100 куб. см).
4.2.4.5. Среда Кауфмана.
К 100 мл среды Мюллера добавляют 1 мл водного раствора
бриллиантового зеленого (1:1000) и 5 мл стерильной бычьей желчи.
Приготовленную смесь стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Среда сохраняется длительное время. До стерилизации среда зеленого
цвета, после стерилизации она приобретает зеленовато-коричневый
тон.
4.2.4.6. Селенитовая среда накопления Лейфсона:
селенит натрия кислый - 4 г
пептон импортный - 5 г
фосфат натрия двузамещенный безводный - 7 г
фосфат натрия однозамещенный - 3 г
лактоза - 4 г
дистиллированная вода - 1000 мл
Среду готовят из двух основных растворов. Прежде всего
экспериментально определяют точную пропорцию двузамещенного и
однозамещенного фосфата натрия, которая с используемым образцом
пептона и кислого селенистокислого натрия дает рН не выше 6,9-7,1,
что регулируется изменением соотношения фосфатов. Такая
предварительная подтитровка производится всякий раз, когда
меняется серия любого из входящих в среду основных ингредиентов
(пептон, кислый селенистокислый натрий, фосфаты).
После установления указанных соотношений к приготовленному
раствору фосфатов добавляют пептон и лактозу, разливают во флаконы
по 50 мл и стерилизуют текучим паром 2 дня по 30 мин или при
112 град.С однократно в течение 30 мин.
Отдельно на стерильной воде готовят 10% раствор кислого
селенита натрия. Перед началом работы на каждый флакон с 50 мл
основного раствора добавляют 2 мл раствора кислого селенита
натрия. Приготовленную среду разливают, в стерильные пробирки по
5-7 мл и закрывают плотно пригнанными пробками.